Nunes será o primeiro a partir para a estrada, com a Rádio Popular-Paredes-Boavista a dar início a um exercício, naquela cidade do distrito de Aveiro, que só terminará cerca de duas horas depois, com Konychev, da equipa do vencedor de 2023, o suíço Colin Stüssi, a partir em último.
O vencedor da classificação dos pontos da edição transata, o checo Daniel Babor (Caja Rural-Seguros RGA), será o penúltimo, com os 119 ciclistas inscritos a partirem com um minuto de diferença entre si.
Vencedor do prólogo em 2021, 2022 e 2023, e por isso primeiro camisola amarela de três edições seguidas, Rafael Reis (Sabgal-Anicolor) sairá para a estrada pelas 17:19, e será o último português a fazê-lo, três minutos depois de António Carvalho (ABTF-Feirense), terceiro em 2022 e 2023.
Às 17:02 será dada ordem de partida ao uruguaio Mauricio Moreira (Sabgal-Anicolor), vencedor em 2022 e vice em 2021, enquanto o campeão de 2023, Colin Stüssi, sai às 16:34 da Avenida 25 de Abril, em que também termina o exercício.
Frederico Figueiredo (Sabgal-Anicolor) sairá pelas 16:11, com Luis Ángel Maté (Euskaltel-Euskadi), quinto em 2023, a fazer-se à estrada dois minutos depois. Artem Nych (Sabgal-Anicolor) vai para a estrada às 16:45, Delio Fernández (AP Hotels&Resorts-Tavira-Farense) às 16:55.
A 85.ª Volta a Portugal arranca na quarta-feira, com o prólogo, em Águeda, terminando, mais 1.539,5 quilómetros depois, em Viseu, em 04 de agosto.