Catarina Macário, de 24 anos, tinha regressado à ação em março, depois de uma grave lesão no ligamento cruzado anterior que já a tinha afastado do Mundial de 2023.
Esta sexta-feira, a selecionadora informou que a jogadora está a sofrer de "uma pequena irritação no joelho" que a impedirá de participar também nos Jogos Olímpicos de Paris.
"Não é uma situação a longo prazo. Ela simplesmente não vai recuperar a tempo", lamentou Hayes, que teve Macário sob seu comando no Chelsea até a recente transferência para os EUA.
"Tendo passado os últimos 12 meses com ela, sei que é uma situação complexa. O bem-estar dela vem em primeiro lugar. Ela fez tudo o que podia e está arrasada", explicou a treinadora.
Macário, que nasceu no Brasil e mudou-se para os Estados Unidos com a família aos 12 anos, tem oito golos e três assistências em 19 jogos pela seleção.
Lynn Williams, que foi convocada como reserva, assumirá o seu lugar numa equipa que ganhou o ouro olímpico em 1996, 2004, 2008 e 2012.
Na preparação para o torneio, a equipa dos EUA vai jogar um amigável contra o México no sábado e outro contra a Costa Rica na terça-feira em Washington.
A estreia olímpica será contra a Zâmbia, em 25 de julho, no Grupo B, onde também estão Alemanha e Austrália.